1、使用前的处理:在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由、缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的（特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时）流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害。
2、使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳.缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。
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1、使用前的处理:在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由、缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的（特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时）流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害。
2、使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳.缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。
新买的高效液相色谱柱在正式使用之前需要做什么？比如什么配比的流动相冲洗？
新购买的“高效液相色谱柱”一般 需要做一下3点：
1：用甲醇冲洗柱子30分钟到1个小时；
2：在1的步骤下，使用甲醇：水=1：:9 作为流动相冲洗柱子30分钟以上；
3：完成上面2步才能用流动相冲洗柱子30分钟以上。再进样。
上面得甲醇为色谱级，水一般选择超纯水、二次蒸馏水。流动相都需过0.45um的膜过滤、脱气才可以使用。
另外：流动相应选择合适的PH更好的保护柱子
很长时间不用的色谱柱要用了，需要做什么前处理么？
如果色谱柱的堵头，两边都密封得很好的话应该没什么问题。
可以先拿甲醇或者乙腈，低流速，0.4-0.6ml/min冲洗半个小时。然后在用甲醇水冲开。长时间不用，柱子里面的甲醇或者乙腈有可能挥发掉了，到时候就可能会干了。先用低流速冲一阵子，免得对填料有损伤。
新色谱柱第一次使用需要注意些什么
第一次使用前，最好先处理一下。我们一般是用65%的乙腈/水溶液在0.1-0.5ml/min低速的情况下冲20min，这一过程最好别接检测器。然后，再渐渐将流速调至1ml/min继续冲2-8小时。
平时使用的时候，注意色谱柱适用的PH值范围、水相的比例（长时间使用水相比例高的流动相会损伤ODS柱）。在使用含有缓冲盐的流动相时，更换前要注意用含水量较多的甲醇过渡，使用完毕后也要含水量较多的甲醇过渡冲洗。
如何正确地使用色谱柱
1、吸附柱色谱
吸附色谱的原理：在一定条件下，硅胶与被分离物质之间产生作用，这种作用主要是物理和化学作用两种.物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力.化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用。
色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管，下端用棉花或玻璃纤维塞住，管内装入吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀，以保证良好的分离效果。除另有规定外，通常多采用直径为0.07～0.15mm的颗粒。色谱柱的大小，吸附剂的品种和用量，以及洗脱时的流速，均按各品种项下的规定。
2、分配柱色谱
方法和吸附柱色谱基本一致。装柱前，先将载体和固定液混合，然后分次移入色谱柱中并用带有平面的玻棒压紧；供试品可溶于固定液，混以少量载体，加在预制好的色谱柱上端。洗脱剂需先加固定液混合使之饱和，以避免洗脱过程中两相分配的改变。
扩展资料：
色谱柱的大小规格由待分离样品的量和吸附难易程度来决定。一般柱管的直径为0.5～l0 cm，长度为直径的10～40倍。填充吸附剂的量约为样品重量的20～50倍，柱体高度应占柱管高度的3/4，柱子过于细长或过于粗短都不好。
装柱前，柱子应干净、干燥，并垂直固定在铁架台上，将少量洗脱剂注入柱内，取一小团玻璃毛或脱脂棉用溶剂润湿后塞入管中，用一长玻璃棒轻轻送到底部，适当捣压，赶出棉团中的气泡，但不能压得太紧，以免阻碍溶剂畅流 （如管子带有筛板，则可省略该步操作）。再在上面加入一层约0.5 cm厚的洁净细砂，从对称方向轻轻叩击柱管，使砂面平整。
常用的装柱方法有干装法和湿装法两种。
1、干装法：在柱内装入2/3溶剂，在管口上放一漏斗，打开活塞，让溶剂慢慢地滴入锥形瓶中，接着把干吸附剂经漏斗以细流状倾泻到管柱内，同时用套在玻璃棒 （或铅笔等）上的橡皮塞轻轻敲击管柱，使吸附剂均匀地向下沉降到底部。
填充完毕后，用滴管吸取少量溶剂把粘附在管壁上的吸附剂颗粒冲入柱内，继续敲击管子直到柱体不再下沉为止。柱面上再加盖一薄层洁净细砂，把柱面上液层高度降至0.1～l cm，再把收集的溶剂反复循环通过柱体几次，便可得到沉降得较紧密的柱体。
2、湿装法：基该方法与干装法类似，所不同的是，装柱前吸附剂需要预先用溶剂调成淤浆状，在倒入淤浆时，应尽可能连续均匀地一次完成。如果柱子较大，应事先将吸附剂泡在一定量的溶剂中，并充分搅拌后过夜 （排除气泡），然后再装。
无论是干装法，还是湿装法，装好的色谱柱应是充填均匀，松紧适宜一致，没有气泡和裂缝，否则会造成洗脱剂流动不规则而形成“沟流”，引起色谱带变形，影响分离效果。
参考资料来源：百度百科-柱色谱
样品溶液进色谱柱前应做如何处理
样品溶液进色谱柱前应这样处理：
样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀释等步骤外,样品需要: ①过滤; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色谱(低压柱层析) 。这些操作可以是手工进行或实行自动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。
样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。
有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分离度(质量变化) 。样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响试验的精确度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。
用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。
使用新色谱柱时有哪些注意事项?
简单来说：看说明书→冲洗干净系统→活化柱子→性能测试，完成了就可以用于检测样品了。
详细的如何维护色谱柱和色谱系统才是关键，详细的介绍可以浏览agilent，waters等色谱网站的相关知识。
色谱柱的安装：
1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接头，只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。
流动相平衡：
1、在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。
2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡）。
3、流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
样品制备与操作：
1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。
3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。为获得最佳分离效果，使用时请不要超过200kgf，而且避免压力突然上升或变化，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外最高操作温度不要超过60℃。
保存色谱柱：
1、如果流动相含有酸或无机盐，应当先用去离子水（20倍柱体积）冲洗干净。然后用用100％乙腈或甲醇保存色谱柱。最后用柱子的接头密封，并放在稳定的环境中存放。
2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落，避免造成色谱柱性能的降低。
色谱柱的再生：
1、用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱子，建议按柱子的箭头方向冲洗，尽可能不反冲：冲洗时使用的的参考溶剂顺序是水、甲醇、氯仿、异丙醇、甲醇。
C18色谱柱使用的日常注意事项有哪些
在使用液相色谱C18仪柱过程中，须注意以下事项：
1、新C18色谱柱在使用前，须先用甲醇或乙腈试剂以20倍柱体积低流速冲洗，作用是使固定相能充分润湿、碳链舒展，使色谱柱的性能达到好状态。具体操作是，将配制好65%的乙腈/水冲洗后，把色谱柱进口端连接在色谱仪上，出口端放空（不可连上检测器，以免污染了检测器），以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速将色谱柱中的清稀溶液吹干，过20分钟后再接上检测器，以1.0ml/min的流速，继续冲洗2~8小时；
2、液相色谱仪检测分析样品完毕后，须冲洗色谱柱。尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；
3、若色谱柱处于长期闲置状态时，要将色谱柱冲洗，建议冲洗3-4小时以上，后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液（如90%甲醇水）中；?
4、由于C18柱的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响；由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%；
5、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效；
6、色谱柱压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲?洗至压力恢复即可；若判断并非盐析出，以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需寻找其他原因。
新买的C18色谱柱在使用之前要怎样处理才能保护好它。
用甲醇：水=50:50（v/v)冲洗柱子，每次使用后都保存在甲醇：水=50:50（v/v)的流动相中。
色谱柱怕污染残留和柱压过高，残留每次使用后都用较高比例的有机相冲洗，然后在替换到50/50的甲醇/水中。柱压过高要尽可能避免。
其他就没什么了，C18柱子也不贵，除了超高压UPLC用的柱子。坏了就换新的呗，毕竟是消耗品。
新的迪马液相色谱柱用之前需要做哪些处理呢？
此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
色谱柱老化
在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化
要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化
柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
C．对于极性键合柱的特殊说明
由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。如果这些溶剂不能混溶，必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。
柱色谱中加混合样品时应该注意哪些操作
柱色谱的使用注意事项很多，作为精密测试仪器，我们要尽可能多的考虑能够引起各种误差的操作。不仅仅是加注样品时候哦。
1. 色谱柱使用前注意事项：
色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱，轻则没有数据，重则报废。吓人不吓人你说。
2. 流动相：
在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生，当然一般情况下都是随用随配的，没人懒到一下配好几天用的。
流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡）。
流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。一旦造成这种情况，很难恢复。
色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。避免压力突然上升或变化幅度过大，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。操作温度不要超过60℃哦，
3. 样品：
样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。
样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
ps：题主认为以上啰嗦的太多么？要知道这么精密的仪器，用起来的啰嗦事更多，否则也对不起那么精准的数据不是？科学要严谨，操作多谨慎。
